Клеточные методы оценки иммунитета

Рейтинг пользователей: / 10
ХудшийЛучший 

Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ). Переход малых лимфоцитов в властные формы, способные к пролиферации и дальнейшей дифференцировке называется бластгрансформацией и сопровождается морфологическими изменениями лимфоцитов. Бласты - крупные, округлой формы клетки имеют большое ядро, занимающее большую часть цитоплазмы. В ядре содержится несколько крупных базофильных ядрышек, цитоплазма бластов зернистая. Одна бластная клетка может дать клон из 16-32 и даже 64 клеток, обладающих более высокой иммунокомпетентностью, чем исходный лимфоцит.

Бласттрансформация лимфоцитов может быть вызвана специфическими и неспецифическими стимуляторами (митогенами). К бактериальным митогенам относятся полисахариды грамотрицательных бактерий, туберкулин микобактерий и др.

Способностью вызывать бласттрансформацию лимфоцитов обладают отдельные продукты животного (иммуноглобулин, выделенный из гетерологичной иммунной сыворотки) и растительного (фитогемагглютинин - ФГА) происхождения.

Неспецифические стимуляторы вовлекают в процесс бласттрансформации большую часть лимфоцитов независимо от их иммунологической специфичности. Причем одни из них активируют только Т-клетки (ФГА), другие преимущественно В-клетки (туберкулин, липополисахариды).

Специфическими митогенами являются растворимые и корпускулярные антигены, которые вовлекают в процесс бласттрансформации иммунные к ним Т - и В-лимфоциты. В отличие от неспецифических стимуляторов антигены активируют только те лимфоциты, которые несут специфические к нему рецепторы.

РБТЛ изучают в культуре лимфоцитов in vitro. При постановке РБТЛ у человека берут кровь или предварительно выделенные из нее лейкоциты и вносят их в среду 199 или Игла, затем добавляют специфический антиген или митоген. Учет реакции после внесения митогенов проводят через 2-4 суток, а после стимуляции антигенами через 3-5 суток. Неспецифический митоген ФГА трансформируют в бласты 70-80%, а ЛПС - 30% лимфоцитов крови человека. Под влиянием специфических антигенов в бласты трансформируются не более 7-12% малых лимфоцитов.

Результаты РБТЛ можно учитывать морфологически - прямым подсчетом бластов в окрашенных препаратах под микроскопом. При наличии аппаратуры РБТЛ учитывают радиометрическим методом, измеряя уровень включения в ДНК лимфоцитов меченного тритием тимидина.

Способность к бласттрансформации отражают функциональную активность иммунокомпетентных клеток, поэтому РБТЛ с антигенами и неспецифическими стимуляторами применяют для оценки иммунного статуса организма.

Реакция подавления миграции лейкоцитов (РПМЛ). Сущность ее в том, что в присутствии антигенов лимфоциты выделяют лимфокины, в частности, фактор, подавляющий миграцию лейкоцитов. К взвеси лейкоцитов добавляют антиген и заполняют ею капиллярные трубочки (контроль - без антигена или посторонний антиген). Эти капилляры помещают в камеры или лунки, заполненные питательной средой. После инкубации при 37°С 18 часов измеряют зону миграции клеток из капилляров или подсчитывают их количество. Если есть иммунные клетки (т. е. организм сенсибилизирован к антигену), то миграция клеток подавляется.